细胞免疫化学:免疫酶标技术

http://www.microimage.com.cncyh(2010-11-25 09:49:25)

  1) 直接法

  1.标本固定。2.PBS洗涤2×3分钟。3.1%H2O2(或1%H2O2 甲醇)抑制内源性过氧化物,室温10~20分钟。4.正常血清(1:10)孵育,室温20分钟。5.滴加酶标记的抗体37℃1小时或4℃过夜。6.PBS洗涤3×3分钟。7.DAB+H2O2显色5~10分钟,镜下控制染色结果。DAB+H2O2应用前15分钟配制。8.充分水洗后,复染、脱水、透明、封片、镜检。

  2间接法

  1.标本固定。2.PBS洗涤2×3分钟。3.1%H2O2(或1%H2O2 甲醇)抑制内源性过氧化物,室温10~20分钟。4.正常血清(1:10)孵育,室温20分钟。5.滴加第一抗体,37℃1小时或4℃过夜。6.PBS洗涤3×3分钟。7.滴加酶标二抗,室温1小时。8.PBS洗涤3×3分钟。9.0.04%DAB+0.03 %H2O2显色5~10分钟。10.充分水洗后,复染、脱水、透明、封片、镜检。

  3PAP法(过氧化物酶抗过氧化物酶抗体复合物法)

  1.标定固定后,PBS洗涤。2.1%H2O2(或1%H2O2 甲醇)阻断内源性过氧化物,室温10~20分钟。3.PBS洗涤2×3分钟。4.正常血清(二抗的正常血清)孵育,室温20分钟。5.滴加一抗,室温1小时或4℃过夜。6.PBS洗涤3×3分钟。7.滴加二抗,室温30分钟。8.PBS洗涤3×3分钟。9.加PAP复合物,室温60分钟。10.PBS洗涤3×3分钟。11.0.04%DAB+0.03%H2O2显色5~10分钟。12.充分水洗。13.苏木精复染,封片观察。

  4PAP

  1~10同单PAP法。11.二次加酶标二抗。12.PBS洗。13.二次加PAP。14.PBS洗。15.0.04%DAB+0.03 %H2O2显色5~10分钟。16.苏木精复染核,封片,镜检。

  5ABC法(卵白素-生物素-过氧化物酶复合物法)

  1~8同PAP法9)加ABC液,室温60分钟。10)PBS洗。11)0.04%DAB+0.03%H2O2显色5~10分钟。12)充分水洗。13)苏木精复染核,封片,镜检。

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