MTT方法的使用步骤

http://www.microimage.com.cncyh(2010-11-24 15:36:35)

  1:接种细胞:用含10%胎小牛血清得培养液配成单个细胞悬液,以每孔

  1000-10000个细胞接种到96孔板,每孔体积200ul.

  2:培养细胞:同一般培养条件,培养3-5天(可根据试验目的和要求决定培养时间)。

  3:呈色:培养3-5天后,每孔加MTT溶液(5mg/ml用PBS <ph=7.4>配)20ul.

  继续孵育4小时,终止培养,小心吸弃孔内培养上清液,对于悬浮细胞需要离心后再吸弃孔内培养上清液。每孔加150ul DMSO,振荡10分钟,使结晶物充分融解。

  4:比色:选择490nm波长,在酶联免疫监测仪上测定各孔光吸收值,记录结果,以时间为横坐标,吸光值为纵坐标绘制细胞生长曲线。

  注意事项:

  (1)选择适当得细胞接种浓度。

  (2)避免血清干扰:一般选小于10%的胎牛血清的培养液进行试验。在呈色后尽量吸尽孔内残余培养液。

  (3)设空白对照:与试验平行不加细胞只加培养液的空白对照。其他试验步骤保持一致,最后比色以空白调零。

 

 

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