快速电镜制样技术在诊断电镜中的应用

http://www.microimage.com.cn刘旭明 王萍 唐新萍 姜秀英(2010-11-23 11:57:01)

  临床与实验病理学杂志 1999年第1期第15卷 技术交流

  作者:刘旭明 王萍 唐新萍 姜秀英

  单位:刘旭明 王萍 唐新萍(兰州军区乌鲁木齐总医院,乌鲁木齐 830000);姜秀英(广州军区总医院临床实验科)

  关键词:组织包埋;显微镜检查;电子

  近年来,随着电镜样品制备技术的改进,诊断电镜为临床快速诊断和研究工作提供了方便。现将我院近4年快速电镜制样技术总结如下。

  1 材料和方法

  资料系我院病理科电镜室1993年10月~1997年8月接收的临床各科送检的疾病,肿瘤,动物实验等电镜检查标本(1 024例),标本均为手术中或手术后及时取材的样品,取材时以利刀切取病检组织3块,每块大小1 mm3,所取组织立即固定于2.5%戊二醛中2~3 h,而后再固定于1%OSO4中1~1.5 h,常规梯度丙酮脱水透明(50%,70%,80%,90%各10 min,100%15 min×3次,丙酮与包埋剂1∶1混合液浸透4~5 h,然后以Spurr低粘度包埋剂(北京英特公司进口,英国产品)包埋聚合8 h,常规修块,半薄切片定位,LKB超薄切片机切片,铅铀染色。

  2 结果

  2.1 快速电镜样品制备 我们用低粘度Spurr包埋剂,结合地区气候特点改进配方,以ERL(二氧化-4-乙烯环乙烷)10 ml,DER(a-多聚乙二醇环氧化物树脂)7 ml,NSA(壬烯基丁二酸)26 ml,和DMAE(nn-二甲基乙醇胺)0.4 ml,于室温下混合成包埋剂,在包埋板上包埋,70℃烤箱中聚合8 h,聚合块硬度适中,修块,半薄和超薄切片均很顺利。

  2.2 快速制样电镜诊断 应用快速制样所做1 024例均进行电镜诊断,这些病例中各种疾病167例(16.3%),良性肿瘤86例(8.4%),恶性肿瘤603例(58.9%),动物实验168例(16.4%)。其中完全依赖电镜确诊的病例为85例(8.3%),主要为恶性肿瘤。由于低粘度包埋剂制做的肿瘤样品,组织细胞微细结构保持良好,图像清楚,因此可拍出清晰的照片(图1,2),故能准确地进行电镜诊断。快速电镜制样以其快和微细结构清楚在低分化肿瘤和肾炎的分型诊断中发挥了决定性作用。

  图1LM下为肺小细胞癌,EM下癌细胞中可见微腺泡(MAV),分泌颗粒(G),并见少量神经内分泌颗粒(NG),为低分化腺癌伴神经内分泌分化。EM×6000

  图2LM下为恶性小细胞肿瘤,EM下瘤细胞间有明确的细胞连接(CJ),证实为小细胞未分化癌,排除了淋巴瘤、小细胞间叶性肿瘤。EM×6000

  3 讨论

  快速电镜样品制备是满足临床电镜诊断的必要条件,优良的电镜样品和满意的超薄切片是正确诊断的前提。我们应用低粘度Spurr包埋剂使电镜样品聚合时间由60 h缩短至8 h,整个电镜样品制备过程可以在两天内完成,电镜报告几乎可以与活检同步。这其中主要是由于Spurr包埋剂中低粘度树脂的粘度低,仅为7~8 cPa(厘泊),混合后的包埋剂粘度也仅为60 cPa左右。而Epon 812约为210 cPa,环氧树酯618则高达2 000~2 500cPa。

  由于粘度低它能很快渗透到组织中,渗透彻底,而且聚合充分、均匀,聚合前后体积变化小,组织无变形,切割性能好,加上催塑剂DER,固化剂NSA有较好的固化支撑作用,因此切片不仅透明度好,也有足够支撑力,能耐受电子束的轰击,电镜下细微结构保持良好,可完全达到临床诊断电镜的要求。

  在Spurr包埋剂的实际应用中,需根据各地区气候特点和工作条件与习惯进行配方调整,如催塑剂DER它可调节聚合块软硬度,量多软,量少则硬,而DMAE的量则与聚合快慢密切相关,量多聚合快,量少则聚合慢,北方地区气候干燥,不易返潮,可适当增加DER的用量,减少DMAE的量,聚合块硬度适当,易于超薄切片。而南方则应适当减少DER用量而增加DMAE的用量,聚合块稍硬,聚合快,避免了潮湿气候的影响,可保证超薄切片的质量。在日常工作中上述配方可依工作量按比例大量配制,如一次配100~200 ml(2~4个标准量)放于冰箱中冷藏,包埋前复温2 h即可,减少了配制的麻烦和试剂的浪费,但每次用后应密闭好,防止挥发。实践证明,低粘度包埋剂的合理应用既能达到快速制备电镜样品,又保证了超薄切片中组织微细结构的有效保存,十分有利于临床诊断电镜的开展。

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