彩色免疫金银染色方法(coloured IGSS,CIGSS)

http://www.microimage.com.cncyh(2010-11-17 15:30:45)

  彩色免疫金银染色方法(coloured IGSS,CIGSS)是由Frite和Hoenes等(1986)建立的一种新方法,刘彦仿等(1988)在《中华病理学杂志》上也报道了改进后的 CIGSS方法。其基本原理是在IGSS法的基础上,根据洗彩色照片的显影原理而发展起来的,即IGSS后,在抗原位点处生成的银颗粒经铁氰化钾与溴化钾的氧化反应,将银颗粒氧化成溴化银,后者与彩色显影剂起还原反应,生成金属银,而彩色显影剂本身则被氧化,其氧化产物使彩色成色剂由五色变成有色的染料,并沉积在银颗粒的部位,金属银变成了银离子。由于染料只能通过彩色显影剂沉积在有银的部位,不会发生非特异性背景染色。

  一、操作步骤

  (1)石蜡切片常规脱蜡至水。

  (2)0.1%胰蛋白酶37℃消化20min,或抗原修复20min(98℃),自然冷却至室温。

  (3)0.05mol/L(pH7,4)TBS洗3×3min.

  (4)1%EA(卵蛋白)15min,不洗。

  (5)适当稀释的特异抗体室温4h或4℃孵育20h,或37℃孵育1h.

  (6)0.05mol/L(pH7.4)TBS洗3×5min.

  (7)0.02mol/L(pH7.4)TBS(内含0.1%BSA)洗10min.

  (8)1%EA 15min,不洗,1:10-1:20稀释的PAGlonm室温孵育1h,或37℃孵育30min.

  (9)0.05mol/L(pH7.4)TBS洗10min.

  (10)1%戊二醛洗10min.

  (11)双蒸水洗5min.

  (12)l%明胶洗5min.

  (13)银避光显影(见银显影剂配方)8~15min

  (14)双蒸水洗15min.

  (15)固定:用显影定影液(1;4或1:10)固定5min,也可以用15%硫酸钠-20%硫代硫酸钠混合液固定1-3min,或用1%戊二醛固定5rain,温水洗3~6min.

  (16)漂白:用2%铁氰化钾和1%溴化钾洗10min,双重蒸馏水洗5rain.

  (17)彩色显影:用。-萘酚或菲尼酮或碱性品红显色2-4min,双重蒸馏水洗5~10min.

  (18)固定:2%硫代硫酸钠和1%亚硫酸钠洗Stain.

  (19)流水冲洗。

  (20)缓冲甘油封片,观察。

  二、CIGSS的优点

  (1)阳性结果比黑色更鲜明。

  (2)可以使弱信号得到进一步放大。

  (3)可部分消除IGSS背景染色。

  (4)信号/背景比值高。

  (5)是开展IHC双重或多重标记的新途径。

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