免疫金电镜分析

http://www.microimage.com.cntomy(2010-11-05 15:03:56)

免疫金电镜技术现已在免疫化学和组织化学研究中得到了广泛应用、其所以能成为电镜下较为理想的免疫标记物主要有如下优势:

(1)胶体金颗粒在电镜下具有很高的电子密度,大小颗粒清晰可辨,且不影响对原有超微结构的观察。
(2)通过计量被检部分金颗粒,可以对被检抗原或抗体进行免疫定量研究。
(3)采用不同直径的金标抗体进行免疫双重或多重标记染色,能在一张电镜图片上同时显示两种或多种被检测物质的组织或细胞的超微结构。常用的胶体金探针可以是金标记的第一抗体(McAb或PcAb)、第二抗体、SPA及生物素。根据需要,有时也应用植物血凝素和酶类。

金标技术在电镜水平的应用,主要方法包括:包埋前染色、包埋后染色、免疫负染色、双标记技术和原位杂交技术等。实验证明,该法样本用量少、检测速度快、对比明显、操作简便、敏感性和特异性高,既可用于抗原检测,也可用于抗体检测。因此,可同时适用于科研和诊断。

以下是一些近年来免疫金电镜方面的研究进展:
(1)免疫不育研究的关键,是寻找与不育相关的精子抗原及其抗体。有人应用免疫金标记法对51KD精于膜抗原的抗体在精子上的定位进行了超微结构观察,免疫电镜染色采用包埋前染色法。电镜观察见精子的头、颈、体及尾部结构清晰,细胞器丰富。经含有抗51KD抗体(AsAb)阳性血清标记的精子,在其顶体、顶体后区、胞膜和胞浆部位均见有金颗粒存在;而不含抗51KD抗体(AsAb)阳性血清标记的精子,除精于顶体、胞膜和胞浆部位有金颗粒外,其余部位均未见金颗粒标记。电镜观察结果显示,含抗51KD抗体的阳性血清作用于精子后,经免疫金探针标记,精子顶体后区出现金颗粒,说明51KD精子抗原定位于顶体后区,而顶体后区是精子十分重要的功能区,该区域抗原很少,提示此抗体可能与不育关系密切。该研究应用免疫金标记法,进行了抗51KD抗体在精子的免疫电镜定位,并获得较为满意的结果。为与男性不育相关的精子抗原及其抗体的研究提供了可行方法,对男性不育症患者的诊断及治疗提供了可靠依据。

(2)通过免疫电子显微镜可以观察到,喹啉衍生物(QUIN)在人体细胞代谢中的重要作用。银增强的胶体金方法结合电镜用于免疫分析测定细胞中的QUIN可获得很好的效果,金颗粒的数目代表了QUIN免疫活性。随着QUIN浓度水平的提高,金颗粒的标记位置不变而数目相应的增加。

(3)Annexin VI是一种在老鼠肝脏细胞中对肝生理活动起重要作用的蛋白质,经过双重胶体金标记老鼠肝脏超薄切片上的抗annexin VI抗体可定量检测annexin VI,标记效率是80%。这样annexin VI成为第一个已知的参与肝细胞受体循环和转运的结构蛋白质。

(4)通过胶体金免疫电镜分析兔子十二指肠上皮细胞不同位置处的胃动素和血液中的复合胺表明,与复合胺反应的胶体金集中在分泌腺的颗粒上,而与胃动素反应的胶体金在颗粒外部,表明这两种物质不是处在同一位置。

(5)免疫金电镜分析进行蛋白质定位研究,例如青蛙卵母细胞核酸包膜中端粒结合蛋白质的定位研究。

(6)BSP(Bone sialoprotein)和OPN(osteopontin)是胶原矿化组织中两种主要的非胶状蛋白质,可利用胶体金对细胞进行包埋处理,来跟踪上述物质,来分析其在生命活动中的作用。

(7)胶体金标记、高分辨扫描电子显微镜研究疱疹病毒和被感染细胞表面的病毒单一糖蛋白,发现用非包层的方法来标记的观察效果要优于传统的包层方法。

(8)胶体金不但可以测定血清中的免疫球蛋白,还可以测定鸟类蛋黄中的免疫球蛋白,已经实验过的抗原有乙肝表面抗原、马铃薯病毒和细菌多聚糖等。
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