主流的激光显微切割技术比较(Zeiss、Arcturus、Leica和Eppendof)(Microimage译)

http://www.microimage.com.cnTina(2009-06-17 18:20:28)

 

 

(以下内容由中国显微图像网译制,转载请注明!)

一、引子

如果想要了解癌细胞和周围正常细胞的不同,或者把干细胞从无分化细胞中分离出来,您必须在解剖镜下把想要的样品分离出来,但多半会污染样品。

如果想要在分子水平检测疾病的发生过程,您会想看到特异细胞,如乳癌细胞” Arcturus LCM 仪器公司的产品经理Steven Blakely 解释道:如果看到的是整个组织,特异细胞的特征信号就会丢失在整个细胞群体中。

二、激光显微切割的四大厂商

激光显微切割系统,就像它的名字代表的一样,这个系统是用激光精确地切割组织、细胞核细胞群,切割完的细胞可以去提DNARNA、蛋白,或拿整个细胞去培养。

主要生产商有三家: MDS Analytical TechnologiesLeica MicrosystemsCarl Zeiss MicroImaging,外加一个相对小些的公司 MMI (Molecular Machines & Industries)。他们共同的特征是激光做为工具切割固定或活细胞,组织的厚度可以不同,细胞的位置也可不同。

1、  Arcturus

Arcturus (现在是MDS Analytical Technologies公司的一部分)1997年推出世界上第一台商用激光显微切割系统 ,目前的旗舰产品ArcturusXT仍然以此技术为基础。

ArcturusXT搭建在倒置显微镜上,被称为CapSure LCM Cap,有个装置叫样品帽,冒上覆膜。在切割时,用户先把样品帽定位在要切的目标上,激光打在帽上,激活样品帽上的膜,覆盖在细胞上,并把它粘起,靠物理力分离,然后提取或直接培养细胞。

“Arcturus LCM的最大好处是它一直监护着样品,从未离开 ” Blakely说。相比之下,其他系统要把细胞移到一个单独的收集器里,如Zeiss的激光捕获或Leica的靠重力。

2、  Zeiss

ArcturusXT一样,ZeissPALM也使用倒置显微镜,但它不用近红外激光,而采用紫外激光切割。它们称自己的系统为无污染激光压力弹射系统。Richard Ankerhold说:样品很小,几乎无伤害。用户发现这个分离过程很温和,Zeiss自己也证实分离后的细胞在遗传和基因表达水平没发生变化。

3、  Leica

Leica LMD6000也有紫外,但使用正置显微镜。和对手不同,LMD6000靠棱镜引导激光,而不是移动载物台。 要切割的细胞放在有薄聚乙烯箔片的载玻片上,一旦激光穿过物镜和切片,它将被箔片吸收,并把箔片蒸发,同时蒸发细胞边的一些组织,一旦二者的边界完全分开,目标物将会依靠重力落下。

当然还有其他不同,PALM可以配备光镊操作切割细胞。而Arcturus 利用一个倒置帽收集样品,而PALM利用有机械手可以把收集到的样品放在96孔板中。另外,ArcturusXT 可以再近红外激光上加紫外切割较厚的组织。

4、  Eppendorf

如果经费紧张,Eppendorf 可以提供手动切割系统PPMD ,产品经理Sonja VossPPMD不需要任何耗材,尤其适用于再培养的细胞,这样不会伤害细胞。和激光为基础的系统不同,PPMD不包括显微镜,因此更便宜,大概35000欧元,而激光显微切割一般要120000-150000美元。如ArcturusXT 包括Nikon倒置显微镜Ti-E,近红外激光,高分辨率CCD、特殊物镜等,另外要考虑到观察方法DIC和荧光等。

三、结束语

分离完细胞后,如需要抽提核酸或蛋白,MDS Analytical Technologies,Ambion (part of Applied Biosystems) Qiagen公司有专门的试剂盒。

 这就是为什么这种设备叫激光显微切割系统,而不是激光宏观切割系统” Ankerhold 说,目标就是能从单个细胞中提出RNA,得到更有意思的结果。

 

原文链接:

http://www.biocompare.com/Articles/TechnologySpotlight/956/Laser-Capture-Microdissection.html

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