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蔡司有一款LSM 5 LIVE的共聚焦和一般共聚焦的最大区别是什么?

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只看该作者 40 发表于: 2008-08-20
引用
引用第38楼pic4u于2008-08-20 19:09发表的  : y)v'0q  
API的DeltaVision也已经在市场一段时间了,online deconvolution的概念吧,具体速度多少不是很清楚。 Y 1 i!  
http://www.api.com/lifescience/DeltaVision.html 2WIbu-"l  
w<awCp  
} tU<RvT  
deconvolution对样品有一定的要求,一些明暗对比强烈的样品无法使用该方法,而且失真还很严重。
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只看该作者 41 发表于: 2008-08-21
当在算Airy unit的时候,需要考虑一点的是,最小分辨率投影到CCD芯片上的时候,要乘以物镜的倍数。这个算法同样适用于共聚焦上所需pinhole大小的计算。如果Optovar或者C-mount接口不是1x的话,还要乘以那个倍数。 .$4DK*  
mw`%xID*  
我们来算一算两个物镜:60x / 1.2,和100x / 1.4 (波长用540nm) uHQJ &  
60x物镜:r = 0.61*540nm /1.2 * 60 = 16.47 um &6MGPh7T  
100x物镜:r = 0.61*540nm / 1.4 * 100 = 23.53 um n`68<ybl5  
Z5-"a? {Y  
这样,一般常见的512 x 512 EMCCD的pixel size是16 x 16um,已经满足60x物镜的需求了。而之前所说的128x128快速EMCCD的pixel size是24x24um,也满足100x物镜。想想市场上已经卖了这么多EMCCD,如果连60x的都满足不了的话,估计厂家早就关门了。那个128x128的确实是给一些特殊应用的。 ss,t[`AV{  
1w+&Y;d|  
在尝试自己搭一台共聚焦的时候,就会发现需要买的pinhole大小是要考虑物镜倍数的。 VrO$SmH  
$|6Le; K  
Si*Pi  
0'BR Sa<  
引用
引用第39楼Microgold于2008-08-20 19:59发表的  : w69`vK  
V)Z*X88:Tv  
其实可以算算60×和100×的艾利斑大小,就可以知道需要多小的CCD象素尺寸来满足光学分辨率了:8微米的刚刚慢100×,不能满足60×的,24微米……
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只看该作者 42 发表于: 2008-08-21
不要意思,没有抬杠的意思。 VC>K W{&J0  
不过你说的这个对比强烈的样品不能用deconvolution,是个人经验,还是有文献出处?之前学习的时候,没有看到这点。谢谢。 kX[I|Z=  
D\j1`  
引用
引用第40楼Microgold于2008-08-20 20:03发表的  : /d'^ XYOC  
@YpA'cX7  
deconvolution对样品有一定的要求,一些明暗对比强烈的样品无法使用该方法,而且失真还很严重。
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只看该作者 43 发表于: 2008-08-21
在线deconvolution了?那得有硬件支撑啊
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只看该作者 44 发表于: 2008-08-21
引用
引用第41楼pic4u于2008-08-21 10:27发表的  : p@r~L(>+3  
当在算Airy unit的时候,需要考虑一点的是,最小分辨率投影到CCD芯片上的时候,要乘以物镜的倍数。这个算法同样适用于共聚焦上所需pinhole大小的计算。如果Optovar或者C-mount接口不是1x的话,还要乘以那个倍数。 "V?U^L>SF  
r%_)7Wk*  
我们来算一算两个物镜:60x / 1.2,和100x / 1.4 (波长用540nm) GbStqR~^#  
60x物镜:r = 0.61*540nm /1.2 * 60 = 16.47 um mjB%"w!S  
100x物镜:r = 0.61*540nm / 1.4 * 100 = 23.53 um c(YNv4*X  
.......
,pf<"^li  
不对,你得到的是光学分辨率,但是要在图像上分辨还要满足一个条件:16.47um或23.53um的距离里最少有三个像素(另外一种判据是两个像素),所以,8um的像素刚好满足100×物镜。你也可以这么看,两个相距23.53um的点,是可以用以上100×物镜分辨的,但是这两个点刚好投影在一个24um的像素里,在图像上是分辨不了的。你要分辨这两个,至少需要三个像素,以明暗明的方式显示出来。所以,24um的像素分辨率,100×下应该是72um。 LG&~#x  
这才是我说它分辨率太差的原因---一般人,我不告诉他的。 8LR_K]\  
哈哈……
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只看该作者 45 发表于: 2008-08-21
引用
引用第42楼pic4u于2008-08-21 10:29发表的  : yv4hH4Io  
不要意思,没有抬杠的意思。 /e#_Yg  
不过你说的这个对比强烈的样品不能用deconvolution,是个人经验,还是有文献出处?之前学习的时候,没有看到这点。谢谢。 R;'Pe>  
/`}C~  
Q[`_Y3@j  
纯个人经验! C37KvLQ  
如果是同一个焦面的两对比强烈的样品,共聚焦也不会得到好的效果:要么放弃暗样品,分辨亮的样品;要么让亮样品国饱和,检测分辨暗样品。这两者都要丢失部分信号,关键看选择。 lj'c0k8  
而deconvolution是建立在宽场观察的基础上,非焦面的信号会累积并被采集,对比焦面的暗信号很可能就是过亮的,所以最终成像时必须要有所选择丢失部分信号,并造成deconvolution失真。共聚焦因为可以挡住非焦面的干扰信号,避免其积累,因此对焦面里的信号采集可避免顾此失彼。 xREqcH,vU  
一般,我不告诉别人的。 |UBR8  
哈哈……
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只看该作者 46 发表于: 2008-08-21
嗯,你说的是对的。我倒是忘了考虑奈奎斯特定律。这个应该是2倍的关系,而不是3倍。60x物镜需要8 x 8um,100x物镜需要12 x 12um。多谢 zp , f}  
:*)~nPVV  
不过,可以在C-mount处加个2x 的coupler,牺牲一点field of view,还是可以满足分辨率的要求的。 \*v}IO>2})  
-gv@ .#N  
V-O49  
引用
引用第44楼Microgold于2008-08-21 14:15发表的  : D0us<9q  
1Jd82N\'  
不对,你得到的是光学分辨率,但是要在图像上分辨还要满足一个条件:16.47um或23.53um的距离里最少有三个像素(另外一种判据是两个像素),所以,8um的像素刚好满足100×物镜。你也可以这么看,两个相距23.53um的点,是可以用以上100×物镜分辨的,但是这两个点刚好投影在一个24um的像素里,在图像上是分辨不了的。你要分辨这两个,至少需要三个像素,以明暗明的方式显示出来。所以,24um的像素分辨率,100×下应该是72um。  * j:  
这才是我说它分辨率太差的原因---一般人,我不告诉他的。 T5Sa9\`>  
哈哈……
[ 此贴被pic4u在2008-08-21 18:22重新编辑 ]
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只看该作者 47 发表于: 2008-08-21
这个我倒不觉得是deconvolution的问题。假设有个动态范围无限大的检测器,就不存在饱和和信号丢失的问题。而这个问题是对所有检测器都有的,PMT和CCD都一样。 jMzHs*:  
Y H 2i V  
引用
引用第45楼Microgold于2008-08-21 14:26发表的  : K.*?\)&  
d?v#gW  
纯个人经验! wf=#w}f  
如果是同一个焦面的两对比强烈的样品,共聚焦也不会得到好的效果:要么放弃暗样品,分辨亮的样品;要么让亮样品国饱和,检测分辨暗样品。这两者都要丢失部分信号,关键看选择。 5y(irbk7  
而deconvolution是建立在宽场观察的基础上,非焦面的信号会累积并被采集,对比焦面的暗信号很可能就是过亮的,所以最终成像时必须要有所选择丢失部分信号,并造成deconvolution失真。共聚焦因为可以挡住非焦面的干扰信号,避免其积累,因此对焦面里的信号采集可避免顾此失彼。 CbQ@l@d]  
一般,我不告诉别人的。 95T%n{rz  
.......
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只看该作者 48 发表于: 2008-08-21
引用
引用第46楼pic4u于2008-08-21 18:08发表的  : ;cp-jY_U  
嗯,你说的是对的。我倒是忘了考虑奈奎斯特定律。这个应该是2倍的关系,而不是3倍。60x物镜需要8 x 8um,100x物镜需要12 x 12um。多谢 S~(4q#Dt-  
5\R8>G~H  
不过,可以在C-mount处加个2x 的coupler,牺牲一点field of view,还是可以满足分辨率的要求的。 ;jX_e(T3m  
P%ZWm=lg  
2<ef&?ljk  
.......
Wv=L_E_  
图象分析,三像素时保守的。就像瑞利判据根据的是0.61,?判据(忘记名字了,不查了)的是0.51一样。 wTIf#y1=9  
加透镜没问题,只要不嫌更换麻烦:)
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只看该作者 49 发表于: 2008-08-21
引用
引用第47楼pic4u于2008-08-21 18:10发表的  : 8\I(a]kM`  
这个我倒不觉得是deconvolution的问题。假设有个动态范围无限大的检测器,就不存在饱和和信号丢失的问题。而这个问题是对所有检测器都有的,PMT和CCD都一样。 (>;~((2  
UI!EIZ*~  
[,1j(s`N5  
如果有那样的监测器,那确实不是问题,就好像,如果有无限高灵敏度的检测器时,你可以无限缩小针孔直径赖进一步提高分辨率一样;无限高数值孔径武警来满足一切要求一样。 /,:32H  
但是,你有吗,我有吗,谁有呢? @l;f';+  
哈哈……莫抬杠:)
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只看该作者 50 发表于: 2008-08-21
显微镜中也有Optovar的配置选项,从1x 转到2x 还是不麻烦的。 ~5JXY5 *o  
Qb SX'mx<  
引用
引用第48楼Microgold于2008-08-21 20:08发表的  : V= .'Db2D  
p oNQ<ijK  
图象分析,三像素时保守的。就像瑞利判据根据的是0.61,?判据(忘记名字了,不查了)的是0.51一样。 {j^}"8GB  
加透镜没问题,只要不嫌更换麻烦:)
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只看该作者 51 发表于: 2008-08-21
可能我没表达清楚意思。举这个例子是要说明检测器的限制对所有的方法都是一样的,所以对比度强的样品不光是对deconvolution的方法不好,对其他成像方法来说也是不好的。 )Ibp%'H  
^TnBtIU-B  
引用
引用第49楼Microgold于2008-08-21 20:12发表的  : q(_pk&/  
KLlW\MF1  
如果有那样的监测器,那确实不是问题,就好像,如果有无限高灵敏度的检测器时,你可以无限缩小针孔直径赖进一步提高分辨率一样;无限高数值孔径武警来满足一切要求一样。 ,GGr@})  
但是,你有吗,我有吗,谁有呢? V[A uw3)  
哈哈……莫抬杠:)
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只看该作者 52 发表于: 2008-08-22
引用
引用第50楼pic4u于2008-08-21 22:51发表的  : vzd1:'^t  
显微镜中也有Optovar的配置选项,从1x 转到2x 还是不麻烦的。 k$j>_U? P  
:]v%6i.  
0V@u]  
行,只要你愿意,什么都不是问题。 #;# V1  
………………
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只看该作者 53 发表于: 2008-08-22
引用
引用第51楼pic4u于2008-08-21 22:54发表的  : DN3#W w2[r  
可能我没表达清楚意思。举这个例子是要说明检测器的限制对所有的方法都是一样的,所以对比度强的样品不光是对deconvolution的方法不好,对其他成像方法来说也是不好的。 KCu@5`p  
rf^ Q%ds  
r2M Iw  
我说的很清楚,不是因为检测器的原因,是因为观察方法:非焦面信号累积造成的过高对比度,而共聚焦没有这个问题。 D/uGL t~D(  
换个表达方法,就是deconvolution比共聚焦要求更大的检测动态范围,就能满足一样的实验条件。 5N<f\W,  
这对你也不是问题。 \n$s5i-  
………………
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只看该作者 54 发表于: 2008-08-22
和microgold的讨论还是受益匪浅啊。专门就这个问题请教了一个业界比较资深的技术人员,他说卖16x16um像素点的EMCCD的时候,他都给客户用1.5x 或者2.0x 的 coupler或者optovar,一般来说更推荐optovar,因为更换方便。不过这样使用会损失一些灵敏度。
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只看该作者 55 发表于: 2008-09-03
请问 这怎么跟中间变倍optovar扯上了
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只看该作者 56 发表于: 2012-11-29
真的吗
ymxiu.com/
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只看该作者 57 发表于: 2012-11-30
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引用第15楼violet于2008-08-07 16:46发表的  : {GDmVWG0q  
请不要将产品错乱归类,LSM 5 Live跟Yokogawa CSU/PE Ultraview/BD Carve II/Olympus DSU/Leica SD6000的盘式共聚焦并不是一类产品,原理是有些差别的。 SzwQOs*  
盘式共聚焦转盘上的小孔相当于一般共聚焦的Pinhole,在盘高速旋转时,盘上的许多小孔就成为了一条一条的线,点扫描成为了线扫描,而且是多线一起扫描,速度当然就快了很多。 DS-0gVYeDW  
LSM 5 Live是用特需的部件Beam Shaper将光纤过来的激光变成线状,从而提高扫描速度,当然Pinhole也做成了线状,信号采集换成了线性CCD而不是PMT。 znJ hP}(  
所以,由点扫变成线扫这一点是相同的,但实现点扫到线扫的途径却是不同的。 &8&d3EQ  
Z=B_Ty  
....... J:uW`R  
WwH+E]^e+  
;6@r-r  
gqXS~K9t  
CSU变线扫了? 谁告诉你的, 求科普
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只看该作者 58 发表于: 2012-11-30
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引用第25楼violet于2008-08-12 13:48发表的  : SLO%7%>p  
速度上盘式要快一点,分辨率上应该是5 Live要强一些。 =6woWlfb  
至于说那种更好,不太好比较,需要参考的因素绝不只是灵敏度和分辨率。 -%2[2p  
我也同意许多网友说的:没有最好的,只有最适合的 S7=Bd[4  
8S>&WR%jH]  
k9)jjR*XxG  
能否把你的"应该"解释为自我想象 LAVAFlK5  
5live点共轭吗? UQ'\7OS  
csu点共轭吗? /3;4#:Kkw  
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只看该作者 59 发表于: 2012-11-30
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引用第27楼Microgold于2008-08-20 04:19发表的  : fJSV)\e0  
CSU的速度受限于CCD的速度,就别指望可以真的的达到2000Hz了,以EMCCD为例,512×512,60Hz就基本到头了,和120Hz差好些。 ;XD>$t@  
分辨率要看使用的物镜,具体分析,高倍率物镜对CSU更有利。 <8F->k1"3  
5LIVE的灵敏度不差,虽然还有一些参数没给出来。 I1eb31<  
两套系统都巨贵,不知道哪里那么有银 ex;Y n{4  
'ugR!o1  
\kua9bK  
求5live传感器类型, 么记错的话是线阵的EMCCD吧,
学无止境
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