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蔡司有一款LSM 5 LIVE的共聚焦和一般共聚焦的最大区别是什么?

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只看该作者 40 发表于: 2008-08-20
引用
引用第38楼pic4u于2008-08-20 19:09发表的  : B[NJ^b |  
API的DeltaVision也已经在市场一段时间了,online deconvolution的概念吧,具体速度多少不是很清楚。 kqB\xlS7k  
http://www.api.com/lifescience/DeltaVision.html 4`mO+.za1  
a'[)9:  
bNvAyKc -  
deconvolution对样品有一定的要求,一些明暗对比强烈的样品无法使用该方法,而且失真还很严重。
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只看该作者 41 发表于: 2008-08-21
当在算Airy unit的时候,需要考虑一点的是,最小分辨率投影到CCD芯片上的时候,要乘以物镜的倍数。这个算法同样适用于共聚焦上所需pinhole大小的计算。如果Optovar或者C-mount接口不是1x的话,还要乘以那个倍数。 N l Fo$Y  
Lnx2xoNk  
我们来算一算两个物镜:60x / 1.2,和100x / 1.4 (波长用540nm) ! ZA}b[  
60x物镜:r = 0.61*540nm /1.2 * 60 = 16.47 um N('3oy#8  
100x物镜:r = 0.61*540nm / 1.4 * 100 = 23.53 um (lWKy9eTy`  
DD6'M U4  
这样,一般常见的512 x 512 EMCCD的pixel size是16 x 16um,已经满足60x物镜的需求了。而之前所说的128x128快速EMCCD的pixel size是24x24um,也满足100x物镜。想想市场上已经卖了这么多EMCCD,如果连60x的都满足不了的话,估计厂家早就关门了。那个128x128的确实是给一些特殊应用的。 i\Q":4  
U:Fpj~E_w  
在尝试自己搭一台共聚焦的时候,就会发现需要买的pinhole大小是要考虑物镜倍数的。 "D!Dr1  
" V/k<HRw  
fcn_<Yh0W  
'iDu0LX  
引用
引用第39楼Microgold于2008-08-20 19:59发表的  : 'U*udkn 2]  
)rS^F<C  
其实可以算算60×和100×的艾利斑大小,就可以知道需要多小的CCD象素尺寸来满足光学分辨率了:8微米的刚刚慢100×,不能满足60×的,24微米……
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只看该作者 42 发表于: 2008-08-21
不要意思,没有抬杠的意思。 $K;_Wf  
不过你说的这个对比强烈的样品不能用deconvolution,是个人经验,还是有文献出处?之前学习的时候,没有看到这点。谢谢。 I*%&)Hj~  
P2s^=J0 @  
引用
引用第40楼Microgold于2008-08-20 20:03发表的  : sz){uOI  
ntd ":BKi  
deconvolution对样品有一定的要求,一些明暗对比强烈的样品无法使用该方法,而且失真还很严重。
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只看该作者 43 发表于: 2008-08-21
在线deconvolution了?那得有硬件支撑啊
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只看该作者 44 发表于: 2008-08-21
引用
引用第41楼pic4u于2008-08-21 10:27发表的  : /s-jR]#VA  
当在算Airy unit的时候,需要考虑一点的是,最小分辨率投影到CCD芯片上的时候,要乘以物镜的倍数。这个算法同样适用于共聚焦上所需pinhole大小的计算。如果Optovar或者C-mount接口不是1x的话,还要乘以那个倍数。 @[Jt~ v  
WhVmycdv  
我们来算一算两个物镜:60x / 1.2,和100x / 1.4 (波长用540nm) xaq=?3QOH  
60x物镜:r = 0.61*540nm /1.2 * 60 = 16.47 um LQ&d|giA  
100x物镜:r = 0.61*540nm / 1.4 * 100 = 23.53 um V.G9J!?<P  
.......
, T%pGku  
不对,你得到的是光学分辨率,但是要在图像上分辨还要满足一个条件:16.47um或23.53um的距离里最少有三个像素(另外一种判据是两个像素),所以,8um的像素刚好满足100×物镜。你也可以这么看,两个相距23.53um的点,是可以用以上100×物镜分辨的,但是这两个点刚好投影在一个24um的像素里,在图像上是分辨不了的。你要分辨这两个,至少需要三个像素,以明暗明的方式显示出来。所以,24um的像素分辨率,100×下应该是72um。 hU)f(L  
这才是我说它分辨率太差的原因---一般人,我不告诉他的。 ezNE9g  
哈哈……
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只看该作者 45 发表于: 2008-08-21
引用
引用第42楼pic4u于2008-08-21 10:29发表的  : !JQ~r@j  
不要意思,没有抬杠的意思。 a0j.\g  
不过你说的这个对比强烈的样品不能用deconvolution,是个人经验,还是有文献出处?之前学习的时候,没有看到这点。谢谢。 b2@x(5#  
F'_8pD7  
a} fS2He  
纯个人经验! v{*X@)$  
如果是同一个焦面的两对比强烈的样品,共聚焦也不会得到好的效果:要么放弃暗样品,分辨亮的样品;要么让亮样品国饱和,检测分辨暗样品。这两者都要丢失部分信号,关键看选择。 TF3q?0  
而deconvolution是建立在宽场观察的基础上,非焦面的信号会累积并被采集,对比焦面的暗信号很可能就是过亮的,所以最终成像时必须要有所选择丢失部分信号,并造成deconvolution失真。共聚焦因为可以挡住非焦面的干扰信号,避免其积累,因此对焦面里的信号采集可避免顾此失彼。 \6 0WP-s  
一般,我不告诉别人的。 xla^A}{  
哈哈……
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只看该作者 46 发表于: 2008-08-21
嗯,你说的是对的。我倒是忘了考虑奈奎斯特定律。这个应该是2倍的关系,而不是3倍。60x物镜需要8 x 8um,100x物镜需要12 x 12um。多谢 ZKTBjOa]*  
DNO%J^  
不过,可以在C-mount处加个2x 的coupler,牺牲一点field of view,还是可以满足分辨率的要求的。 NdQ?3'W J  
yYtki  
O]! DNN  
引用
引用第44楼Microgold于2008-08-21 14:15发表的  : !]T|=yw  
JPzPL\  
不对,你得到的是光学分辨率,但是要在图像上分辨还要满足一个条件:16.47um或23.53um的距离里最少有三个像素(另外一种判据是两个像素),所以,8um的像素刚好满足100×物镜。你也可以这么看,两个相距23.53um的点,是可以用以上100×物镜分辨的,但是这两个点刚好投影在一个24um的像素里,在图像上是分辨不了的。你要分辨这两个,至少需要三个像素,以明暗明的方式显示出来。所以,24um的像素分辨率,100×下应该是72um。 e]fC!>w(\  
这才是我说它分辨率太差的原因---一般人,我不告诉他的。 (o=iX,@'2  
哈哈……
[ 此贴被pic4u在2008-08-21 18:22重新编辑 ]
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只看该作者 47 发表于: 2008-08-21
这个我倒不觉得是deconvolution的问题。假设有个动态范围无限大的检测器,就不存在饱和和信号丢失的问题。而这个问题是对所有检测器都有的,PMT和CCD都一样。 wvY$ s ;  
>d |W>|8e  
引用
引用第45楼Microgold于2008-08-21 14:26发表的  : |/Z4lcI  
NO)* UZ  
纯个人经验! eyOAG4QTV  
如果是同一个焦面的两对比强烈的样品,共聚焦也不会得到好的效果:要么放弃暗样品,分辨亮的样品;要么让亮样品国饱和,检测分辨暗样品。这两者都要丢失部分信号,关键看选择。 -)/>qFj )  
而deconvolution是建立在宽场观察的基础上,非焦面的信号会累积并被采集,对比焦面的暗信号很可能就是过亮的,所以最终成像时必须要有所选择丢失部分信号,并造成deconvolution失真。共聚焦因为可以挡住非焦面的干扰信号,避免其积累,因此对焦面里的信号采集可避免顾此失彼。 ;+\;^nS3d  
一般,我不告诉别人的。 [ q}WS5Cp  
.......
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只看该作者 48 发表于: 2008-08-21
引用
引用第46楼pic4u于2008-08-21 18:08发表的  : E yuc~[  
嗯,你说的是对的。我倒是忘了考虑奈奎斯特定律。这个应该是2倍的关系,而不是3倍。60x物镜需要8 x 8um,100x物镜需要12 x 12um。多谢 '7$v@Tvnre  
6*%lnd+_  
不过,可以在C-mount处加个2x 的coupler,牺牲一点field of view,还是可以满足分辨率的要求的。 kG E|17I  
UV=TU=A\o  
;^;5"n h  
.......
7+0hIKrFC  
图象分析,三像素时保守的。就像瑞利判据根据的是0.61,?判据(忘记名字了,不查了)的是0.51一样。 0]T ;{  
加透镜没问题,只要不嫌更换麻烦:)
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只看该作者 49 发表于: 2008-08-21
引用
引用第47楼pic4u于2008-08-21 18:10发表的  : 1W5YS +pf  
这个我倒不觉得是deconvolution的问题。假设有个动态范围无限大的检测器,就不存在饱和和信号丢失的问题。而这个问题是对所有检测器都有的,PMT和CCD都一样。 ')_jK',1  
T `N(=T^*  
tEb2>+R  
如果有那样的监测器,那确实不是问题,就好像,如果有无限高灵敏度的检测器时,你可以无限缩小针孔直径赖进一步提高分辨率一样;无限高数值孔径武警来满足一切要求一样。 y#r=^r]l)  
但是,你有吗,我有吗,谁有呢? %R(j|a9z  
哈哈……莫抬杠:)
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只看该作者 50 发表于: 2008-08-21
显微镜中也有Optovar的配置选项,从1x 转到2x 还是不麻烦的。 i9w xP i  
?DM-C5$  
引用
引用第48楼Microgold于2008-08-21 20:08发表的  : Wu%;{y~#}  
yU&A[DZQ  
图象分析,三像素时保守的。就像瑞利判据根据的是0.61,?判据(忘记名字了,不查了)的是0.51一样。 h|_G2p^J+"  
加透镜没问题,只要不嫌更换麻烦:)
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只看该作者 51 发表于: 2008-08-21
可能我没表达清楚意思。举这个例子是要说明检测器的限制对所有的方法都是一样的,所以对比度强的样品不光是对deconvolution的方法不好,对其他成像方法来说也是不好的。 oF)+f 4  
dy#dug6j  
引用
引用第49楼Microgold于2008-08-21 20:12发表的  : qP*$wKY,  
.pr-  ^  
如果有那样的监测器,那确实不是问题,就好像,如果有无限高灵敏度的检测器时,你可以无限缩小针孔直径赖进一步提高分辨率一样;无限高数值孔径武警来满足一切要求一样。 \c_1uDRoUn  
但是,你有吗,我有吗,谁有呢? g_5:o 3s  
哈哈……莫抬杠:)
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只看该作者 52 发表于: 2008-08-22
引用
引用第50楼pic4u于2008-08-21 22:51发表的  : W8'cAY  
显微镜中也有Optovar的配置选项,从1x 转到2x 还是不麻烦的。 3tMs61 3  
YYzj:'  
>sv|  
行,只要你愿意,什么都不是问题。 ;3 s_#L  
………………
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只看该作者 53 发表于: 2008-08-22
引用
引用第51楼pic4u于2008-08-21 22:54发表的  : 3<LG~HWST  
可能我没表达清楚意思。举这个例子是要说明检测器的限制对所有的方法都是一样的,所以对比度强的样品不光是对deconvolution的方法不好,对其他成像方法来说也是不好的。 /Y_F"GQ  
4J Bm|Pf(  
R ,-y  
我说的很清楚,不是因为检测器的原因,是因为观察方法:非焦面信号累积造成的过高对比度,而共聚焦没有这个问题。 Gnop  
换个表达方法,就是deconvolution比共聚焦要求更大的检测动态范围,就能满足一样的实验条件。 =G2D4>q  
这对你也不是问题。 vi')-1Y KM  
………………
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只看该作者 54 发表于: 2008-08-22
和microgold的讨论还是受益匪浅啊。专门就这个问题请教了一个业界比较资深的技术人员,他说卖16x16um像素点的EMCCD的时候,他都给客户用1.5x 或者2.0x 的 coupler或者optovar,一般来说更推荐optovar,因为更换方便。不过这样使用会损失一些灵敏度。
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只看该作者 55 发表于: 2008-09-03
请问 这怎么跟中间变倍optovar扯上了
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只看该作者 56 发表于: 2012-11-29
真的吗
ymxiu.com/
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只看该作者 57 发表于: 2012-11-30
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引用第15楼violet于2008-08-07 16:46发表的  : BYsQu.N  
请不要将产品错乱归类,LSM 5 Live跟Yokogawa CSU/PE Ultraview/BD Carve II/Olympus DSU/Leica SD6000的盘式共聚焦并不是一类产品,原理是有些差别的。  WEB enGQ  
盘式共聚焦转盘上的小孔相当于一般共聚焦的Pinhole,在盘高速旋转时,盘上的许多小孔就成为了一条一条的线,点扫描成为了线扫描,而且是多线一起扫描,速度当然就快了很多。 5JRj'G0I  
LSM 5 Live是用特需的部件Beam Shaper将光纤过来的激光变成线状,从而提高扫描速度,当然Pinhole也做成了线状,信号采集换成了线性CCD而不是PMT。 FPXB>D'  
所以,由点扫变成线扫这一点是相同的,但实现点扫到线扫的途径却是不同的。 W2j@Q=YDS  
+h? z7ZY^  
....... i?pC[Ao-_  
g7U>G=,;?U  
^B7C8YP  
1:d,8  
CSU变线扫了? 谁告诉你的, 求科普
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只看该作者 58 发表于: 2012-11-30
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引用第25楼violet于2008-08-12 13:48发表的  : u\eEh*<7q  
速度上盘式要快一点,分辨率上应该是5 Live要强一些。 B^g ?=|{  
至于说那种更好,不太好比较,需要参考的因素绝不只是灵敏度和分辨率。 %2v4<icvq  
我也同意许多网友说的:没有最好的,只有最适合的 #8)*1?  
~6p[El#tS  
*QH28%^  
能否把你的"应该"解释为自我想象 ~?(N  
5live点共轭吗? EAM5{Nc  
csu点共轭吗? .0es 3Rj  
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只看该作者 59 发表于: 2012-11-30
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引用第27楼Microgold于2008-08-20 04:19发表的  : ;w6>"O$a  
CSU的速度受限于CCD的速度,就别指望可以真的的达到2000Hz了,以EMCCD为例,512×512,60Hz就基本到头了,和120Hz差好些。 {NPuu?&  
分辨率要看使用的物镜,具体分析,高倍率物镜对CSU更有利。 j4>a(  
5LIVE的灵敏度不差,虽然还有一些参数没给出来。 o\88t){/kB  
两套系统都巨贵,不知道哪里那么有银 Q\GDrdA  
uQ=^~K:Z~  
]J* ,g,  
求5live传感器类型, 么记错的话是线阵的EMCCD吧,
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