社区应用 最新帖子 精华区 社区服务 会员列表 统计排行
  • 3204阅读
  • 2回复

[分享]滨松sCMOS相机应用于SPIM监测早期胚胎发育

级别: 论坛版主
发帖
41
金钱
133
威望
37
贡献值
0
专家经验值
0
       光片照明显微技术(SPIM)是一种将快速宽场检测和光学切片相结合的荧光成像技术。通过降低漂白剂引起的光毒性,SPIM能够提供长期的三维的时间分辨活体标本成像。 <v -YMk@  
       德国拜罗伊特大学物理实验系I的 Matthias Weiss教授小组,创建了专为小线虫早期胚胎发育成像的自动化SPIM装置。该装置安置了一个491.5nm的扩大光束激光器,该激光器通过一个柱面透镜在一维聚焦到水浸物镜的后焦面,并形成作为光片(最小半高宽为2.8mm)的椭圆畸变高斯光束。通过第二个水浸物镜在垂直于照明光片处采集来自样品的荧光。荧光被过滤并聚焦在滨松 相机的传感器上。该装置的点扩散函数在侧向和轴向的延伸由FluoSpheres(直径20nm)决定,为460nm ,光片束腰为14mm 。 , 2#Q >  
       如图1所示,物镜与光学平台成45°角放置。样品通过xy方向的两个机动平台相对于光片移动。纳米定位仪使样品经过光片以几纳米的精确度移动,因此可以获得样品的三维立体图像。 KZg2`8F   
       该装置通过滨松为其量身定制的LabVIEW程序控制,此LabVIEW程序也具有与控制相机的滨松HOKAWO成像软件连接的接口。 Iv 3O8 GU  
       原始图像的后处理,比如调整个别部分来获得三维数据,可通过定制性的编写Matlab代码来完成。用这种方法,可以监测发育中的胚胎的细胞核,甚至可以评估(assess)有丝分裂中的分裂轴。  G-1qxK  
q 6UZ`9&z  
]s5e[ iS  
U`3?bhzua  
图1:Matthias Weiss教授小组设计的SPIM的光路图。虚线左边的所有组件是俯视图,而右方的所有组件为侧视图。
c3l(,5DtH  
       Matthias Weiss教授小组研究员Philipp Struntz解释了实验条件: xV+\R/)x  
       我们以每层50ms的曝光时间重复采集了线虫胚胎的51个光学切片(相距2微米)。堆栈采集每60秒重复一次来覆盖早期发育过程。图2a显示了此成像中具有代表性的个别切片,图2b显示了从该三维数据中获得的最大投影。因为线虫的细胞谱系是不变的,不仅轨迹而且单独细胞的类型都可以随着时间在三维确定。图2c显示了一个示例。 C TG^lms  
a) 8细胞阶段线虫胚胎(长轴50微米)的不同层。 \9p.I?=  
b) (a)中胚胎的所有51个切片的最大投影,通过高对比显示了所有8个细胞核的位置。 #y#TEw,  
c) 三维细胞轨迹示例。细胞用彩色编码并被命名。轨迹分支点,细胞分裂可见。 l]&A5tz3  
ZG H 7_K  
       Philipp Struntz说,根据我们的数据,我们观察了所有情况下4细胞胚胎的平面细胞排列,胚胎间的细胞运动和分裂轴极为相似。据此很容易得出结论,细胞结构信息在早期线虫胚胎发育中支持细胞排列。获得的时间推移图像使我们能够定量地监测发育胚胎中单独细胞的位置和分裂轴。 Ji,;ri2i  
       Matthias Weiss教授专注于研究物理和生物接口的难题。他的小组精力的集中在定量了解从细胞到有机体的细胞内运输过程、阐明蛋白质和细胞膜的相互作用以及真核细胞的动力学和自组织。 rU9")4sQ  
GjW(&p$&  
p@Os  
描述:滨松sCMOS相机ORCA-FLASH 4.0 V2
附件: SCAS0081E08_C11440-22CU.pdf (813 K) 下载次数:0
描述:滨松sCMOS相机ORCA-FLASH 4.0LT
附件: SCAS0099E03_C11440-42U.pdf (713 K) 下载次数:3
本帖最近评分记录: 1 条评分 威望 +1 隐藏
yelh 威望 +1 2014-12-31 版主很勤快,赞一个,有问题的联系她!
评价一下你浏览此帖子的感受

精彩

感动

搞笑

开心

愤怒

无聊

灌水
分享到:

相关话题

相关产品

查看更多 显微镜价格

级别: 论坛版主
发帖
41
金钱
133
威望
37
贡献值
0
专家经验值
0
只看该作者 1 发表于: 2014-12-30
如需进一步信息请访问拜罗伊特大学物理实验系I的网站: 6 U.Jaai:  
F^%w%E\  
6W i n!4  
qAjtvc2  
因为帖数不足所以暂时发不了链接,只能把网址截图给大家看,有兴趣可以输入浏览器查看。 &=@{`2&  
@)Vpj\jM-C  
级别: 管理员
发帖
3017
金钱
5970
威望
791
贡献值
0
专家经验值
0

只看该作者 2 发表于: 2014-12-31
版主很勤快,赞一个,有问题的联系她!
描述
快速回复

您目前还是游客,请 登录注册
认证码: